Successful evaluation of CT-EGFR, EGFR, BRAF and RAS Kits from EntroGen at CHU Saint-Étienne

Deutsch Français Italiano

INTERVIEW MIT DR. TIPHANIE PICOT* UND FRAU JOSIANNE BENY**, CHU, SAINT-ÉTIENNE

*Molekularbiologin und **Technische Laborantin, Krebszentrum des Universitätsklinikums, Saint-Étienne

Frau Picot, Ihr Pathologielabor führt molekularbiologische Untersuchungen zu therapeutischen und/oder diagnostischen Zwecken durch. Wie lange arbeiten Sie schon mit EntroGen Kits? Welche Techniken haben Sie vorher verwendet?

Wir arbeiten seit 2016 mit EntroGen EGFR-Kits für solide Tumoren und seit 2017 für Plasmaproben. Überzeugt von den Vorteilen der RT-PCR haben wir uns letztes Jahr auch für RAS und seit diesem Jahr für BRAF für diese Methode entschieden. Zuvor haben wir nach Mutationen mittels NGS oder, für RAS, mittels SNAPshot/Sequenzierung gesucht.

Welche Vorteile können Sie nennen?

Die Vorteile der EntroGen-Tests sind zahlreich: Die Zeit bis zur Bereitstellung der Ergebnisse wird von zuvor 3 bis 4 Tagen auf heute 1 Tag reduziert; die Sensitivität ist erhöht, insbesondere für niederfrequente Mutationen, die oft unentdeckt blieben; Die Bearbeitungszeit wird auch durch eine Technik reduziert, die weniger mühsam zu implementieren ist.

Wie passt die rt-PCR in Ihre Routinetätigkeit?

Es hängt alles von den analysierten Genen ab:

CT-EGFR : Die PCR wird für die Diagnose verwendet und NGS wird parallel durchgeführt. Die PCR wird auch verwendet, um auf dringende Anfragen zu reagieren. Das NGS wird zur Überwachung verwendet. Wenn die Resistenzmutation sehr klein ist (und noch genügend DNA im Röhrchen ist), wird eine qPCR durchgeführt, um die Positivität zu überprüfen.

EGFR : Der Test wird jede Woche durchgeführt. Mit der RT-PCR kann man auf dringende Anfragen reagieren. Es ermöglicht auch eine systematische Überprüfung der mit NGS erzielten Ergebnisse und ist besonders effektiv bei bestimmten Problempatienten, bei denen die Mutationen mit dem NGS nicht nachgewiesen werden konnten. NGS wird für 1st Intention und qPCR für Validierung und dringende Anfragen verwendet.

BRAF : Die PCR wird einige Male zur Überprüfung der NGS-Ergebnisse verwendet. In erster Linie wird systematisch die RT-PCR eingesetzt.

RAS : Die PCR ermöglicht eine gezielte Analyse und vermeidet das Screening des gesamten NGS-Panels. Alle interessierenden Mutationen sind in dem Kit vorhanden.

Wann ist die molekulare Diagnostik wichtig? Weshalb? Was sind die Vorteile dieser Art von Ergebnis für den Kliniker?

Die molekulare Diagnostik wird am Universitätsspital Saint-Etienne verwendet, um eine schnelle Anpassung der Behandlung zu ermöglichen. Es geht um personalisierte Medizin. Kliniker sind mit dieser Technik vollauf zufrieden, da sie die Ergebnisse sehr schnell erhalten und sie systematisch 2 Ergebnisse für jeden ihrer Patienten haben.

Sind Sie mit der Leistung / Sensibilität zufrieden?

Die Leistungen sind hervorragend. Die Analyse ist für BRAF etwas kompliziert, aber das ist völlig normal, da die nachgewiesenen Mutationen manchmal sehr nahe beieinander liegen. Die Sensitivität der PCR-Tests ist gut. Darüber hinaus wurden kürzlich Verbesserungen am CT-EGFR-Kit durch die Integration neuer Mutationen vorgenommen, was sehr geschätzt wurde.

Ist der Einsatz weiterer Kits geplant?

Ja, uns könnten der ctRAS Kit und der ALKF6-RT46 Kit interessieren, welcher leider nicht mehr von EntroGen vertrieben wird.

Wie zufrieden sind Sie mit dem Service von BÜHLMANN?

Der BÜHLMANN Service ist aufmerksam und hilfsbereit. Die Produkte erfüllen unsere Erwartungen.

ENTRETIEN AVEC DR. TIPHANIE PICOT* ET MADAME JOSIANNE BENY**, CHU, SAINT-ÉTIENNE

*Ingénieur biologie moléculaire et **Technicienne, Centre Contre le Cancer du CHU de Saint-Étienne, Service Anatomie et Cytologie pathologiques, CHU, Saint-Étienne

Mme Picot, votre laboratoire d’anatomopathologie réalise les tests de biologie moléculaire dans un but thérapeutique et/ou diagnostic. Depuis quand travaillez-vous avec les coffrets EntroGen ? Quelles techniques utilisiez-vous auparavant ?

Nous travaillons depuis 2016 avec les coffrets EntroGen EGFR pour les tumeurs solides, et depuis 2017 pour les échantillons de plasma. Persuadés des avantages de la RT-PCR, nous nous sommes également tournés vers ce choix technique pour RAS l’année dernière, et depuis cette année pour BRAF. Auparavant, nous recherchions les mutations par NGS ou, pour RAS, SNAPshot/sequençage.

Quels sont ses avantages que vous évoquez ?

Les avantages des tests EntroGen sont multiples : le délai du rendu de résultats est diminué, de 3 à 4 jours auparavant à 1 aujourd’hui ; la sensibilité est accrue, en particulier pour les mutations à fréquence faible qui n’était souvent pas détectées ; le temps technicien aussi est diminué avec une technique moins fastidieuse à mettre en œuvre.

Comment s’inscrit la rt-PCR dans votre activité de routine ?

Tout dépend des gènes analysés :

CT-EGFR : la PCR est utilisée pour le diagnostic et le NGS est fait en parallèle. La PCR est également utilisée pour répondre aux demandes urgentes. Le NGS est utilisé pour le suivi. Si la mutation de résistance est très faible (et s’il y a encore assez d’ADN dans le tube), une qPCR est effectuée pour vérifier la positivité.

EGFR : le test est réalisé toutes les semaines. La RT-PCR permet de répondre aux demandes urgentes. Elle permet également une vérification systématique des résultats obtenus avec le NGS et c’est particulièrement efficace pour certains patients problématiques chez qui les mutations n’ont pas pu être mises en évidence avec le NGS. Le NGS est utilisé en 1ère intention et la qPCR pour validation et les demandes urgentes.

BRAF : la PCR est utilisée quelques fois pour une vérification des résultats NGS. La RT-PCR est systématiquement utilisée en 1ère intention.

RAS : la PCR permet une analyse ciblée, et évite de screener tout le panel NGS. Toutes les mutations d’intérêt sont présentes dans le coffret.

Dans quels cas le diagnostic moléculaire est-il important ? Pourquoi ? Quels sont les avantages de ce type de résultats pour le clinicien ?

Le diagnostic moléculaire est utilisé au CHU de Saint Etienne pour permettre une adaptation rapide du traitement. Il s’agit de faire de la médecine personnalisée. Les cliniciens sont pleinement satisfaits de cette technique car les résultats sont rendus très rapidement, et ils ont systématiquement 2 résultats pour chacun de leur patient.

Est-ce que les performances / sensibilité vous conviennent ?

Les performances sont excellentes. L’analyse est un peu compliquée pour BRAF, mais c’est parfaitement normal puisque les mutations détectées sont parfois très proches les unes des autres. La sensibilité des tests PCR est bonne. De plus, des améliorations ont récemment été apportées au coffret CT-EGFR avec l’intégration de nouvelles mutations, ce qui a été très apprécié.

Est-ce que l’utilisation d’autres coffrets est prévue ?

Oui, nous pourrions être intéressés par le coffret ctRAS et le coffret ALKF6-RT46, qui malheureusement n’est plus commercialisé par EntroGen.

Dans quelle mesure êtes-vous satisfait du service de BÜHLMANN ?

Le service BÜHLMANN est à l’écoute et disponible. Les produits sont conformes à nos attentes.

INTERVISTA CON DOTT. TIPHANIE PICOT* E SIGNORA JOSIANNE BENY**, CHU, SAINT-ÉTIENNE

*Ingegnere di biologia molecolare e tecnico**, Centro oncologico dell’ospedale universitario Saint-Étienne, Dipartimento di anatomia patologica e citologia

Signora Picot, il suo laboratorio di patologia esegue test di biologia molecolare a scopo terapeutico e/o diagnostico. Da quanto tempo lavora con i kit EntroGen? Quali tecniche usava prima?

Lavoriamo dal 2016 con i kit EntroGen EGFR per i tumori solidi e dal 2017 per i campioni di plasma. Convinti dei vantaggi della RT-PCR, lo scorso anno ci siamo rivolti a questa scelta tecnica anche per RAS e da quest’anno per BRAF. In precedenza, abbiamo cercato le mutazioni mediante NGS o, per RAS, mediante SNAPshot/sequenziamento.

Quali vantaggi puo descrivere?

I vantaggi dei test EntroGen sono numerosi: il tempo impiegato per fornire i risultati si riduce dai 3-4 giorni prima a 1 oggi; la sensibilità è aumentata, soprattutto per le mutazioni a bassa frequenza che spesso non sono state rilevate; anche il tempo del tecnico si riduce con una tecnica meno noiosa da implementare.

Come si inserisce la RT-PCR nella sua attività di routine?

Tutto dipende dai geni analizzati:

CT-EGFR: la PCR viene utilizzata per la diagnosi e la NGS viene eseguita in parallelo. La PCR viene utilizzata anche per rispondere a richieste urgenti. L’NGS viene utilizzato per il monitoraggio. Se la mutazione di resistenza è molto piccola (e c’è ancora abbastanza DNA nel tubo), viene eseguita una qPCR per verificare la positività.

EGFR: il test viene eseguito ogni settimana. RT-PCR può rispondere a richieste urgenti. Consente inoltre una verifica sistematica dei risultati ottenuti con l’NGS ed è particolarmente efficace per alcuni pazienti problematici nei quali non è stato possibile rilevare le mutazioni con l’NGS. NGS viene utilizzato per la prima intenzione e qPCR per la convalida e le richieste urgenti.

BRAF: la PCR viene utilizzata alcune volte per la verifica dei risultati NGS. La RT-PCR viene utilizzata sistematicamente come prima linea.

RAS: la PCR consente un’analisi mirata ed evita lo screening dell’intero pannello NGS. Tutte le mutazioni di interesse sono presenti nel riquadro.

Quando è importante la diagnosi molecolare? Quali sono i vantaggi di questo tipo di risultati per il clinico?

La diagnosi molecolare viene utilizzata presso l’ospedale universitario Saint Etienne per consentire un rapido adattamento del trattamento. Si tratta di medicina personalizzata. I medici sono pienamente soddisfatti di questa tecnica perché i risultati vengono restituiti molto rapidamente e hanno sistematicamente due risultati per ciascuno dei loro pazienti.

Siete soddisfatti delle prestazioni/sensibilità?

Le prestazioni sono eccellenti. L’analisi è un po’ complicata per BRAF, ma questo è perfettamente normale poiché le mutazioni rilevate sono a volte molto vicine tra loro. La sensibilità dei test PCR è buona. Inoltre, sono stati recentemente apportati miglioramenti al kit CT-EGFR con l’integrazione di nuove mutazioni, che è stato molto apprezzato.

È previsto l’uso di altri kit?

Sì, potremmo essere interessati al kit ctRAS e al kit ALKF6-RT46, che purtroppo non è più commercializzato da EntroGen.

Quanto siete soddisfatti del servizio di BÜHLMANN?

Il servizio BÜHLMANN è attento e disponibile. I prodotti soddisfano le nostre aspettative.